لطخة ساوثرن-نورثرن-ويسترن

في التشخيص الوراثي الجزيئي

SOUTHERN/NORTHERN/WESTERN BLOTTING

 لطخة ساوثرن هي من أولى طرائق التشخيص الجزيئي في علم الوراثة .أزاحتها بشكل كبير الطرق المتأسسة على PCR والسلسلة sequencing المباشرة للدنا.

طريقة إجراء لطخة ساوثرن:

يتم في هذا الإجراء عزل دنا المريض ومن ثم تقطيعه إلى شدف صغيرة عبر إنزيمات الاقتطاع restriction enzymes (إنزيمات جرثومية تشطر الدنا في مواضع شديدة النوعية ) تتفرز الشدف الناتجة حسب الحجم size باستخدام الرحلان على الهلامة , ثم تنتقل بوساطة التلطيخ blotting إلى مرشحة نايلون ثابتة , وتهجن إلى مسبار جين معلوم موسوم شعاعياً يكشف بتعريضه إلى فيلم أشعة X .

كشف الطفرات الوراثية بواسطة لطخة ساوثرن:

يمكن كشف الطفرات عبر هذه الطريقة إذا بدلت الطفرات طول الشدفة الدنا (مقر الاقتطاع) restriction site الذي يغير طراز الاستشراط في لطخة ساوثرن الناجم عن إنزيم التشطر.

تواصل هذه الطريقة فائدتها العظمى في كشف ارتباط linkage جين مع تعدد أشكال دنا موروث محدد داخل أو حول الجين موضع الاهتمام.

يمكن عندئذ تتبع مسار الجين عبر العائلة حتى ولو لم نتمكن من التعرف على العيب الجزيئي المحدد المترافق مع الاضطراب الوراثي يتم في لطخة نورثرن تحليل طراز وغزارة الرنا المرسال الناتج عن جين نوعي.

لا يمكن شطر الرنا بإنزيمات الاقتطاع وتنتج انتساخات transcripts رنا متنوعة مختلفة الطول اعتماداً على حجم وعدد الإكسونات في جين ما.

وهكذا يمكن أن نتوقع كشف الطفرات التي تبدل عدد و  أطوال الإكسونات بلطخة نورثرن.

تتماثل الطريقة المخبرية مع لطخة ساوثرن,باستثناء أننا نستخدم الرنا الحلوي الكامل أو الرنا المرسال وليس الدنا (متشطر عبر إنزيمات الاقتطاع).

تحليل المعلومات في لطخة ويسترن:

يتم في لطخة ويسترن تحليل المعلومات عن حجم وكمية البروتين الطافر في خلاصات خلوية من مرضى لديهم اضطرابات وراثية نوعية , تفضل البروتينات من خلاصة خلية حسب الحجم عبر الرحلان على هلامة البولي أكريلاميد ومن ثم تنتقل إلى غشاء ,يحضن عندئذ الغشاء مع أضداد نوعية للبروتين.

يكشف ضد ثانٍ (ضد الضد الأول ) موسوم بصباغ متألق أو مادة مشعة تآثر interaction الضد والبروتين.

استخدام لطخة ويسترن:

تستخدم لطخة ويسترن لكشف وجود أو غياب وحجم ديستروفين البروتين العضلي عند مرضى الحثل العضلي المرتبط بالصبغي X .

الدكتور رضوان غزال MD, FAAP- مصدر المعلومات : كتاب نلسون طب الاطفال 2016- آخر تحديث 18/1/2018