التهجين الموضعي المتألق

طرق الفيش

FISH TECHNIQUES

FISH في علم الوراثة : هي اختصار لمصطلح : Fluorescence in situ hybridization

التهجين في الموضع التألقيFluorescence in situ hybridization:

التهجين الموضعي المتألق هو تقنية خلوية تعتمد فكرة التهجين الموضعي للتحري عن وجود تسلسلات دنوية معينة بغية تشخيص المرض أو متابعة العلاج. يتم استخدام مسبار يحتوي على صبغات متألقة يتم رأيتها باستخدام مجهر متألق في حالة وجود التسلسل الدنوي المطلوب

يشمل استخدام تسلسل دنا فريد unique كمسبار يبحث عن تسلسل دنا مستهدف في عينة المريض.

دنا DNA المسبار:

يوسم مسبار الدنا النوعي للجين أو النوعي للموضع بواسم tag  (مثل ملون تألقي fluorochrome ) يسمح باكتشافه عبر الفحص المجهري التـألقي.

إن تسلسل الدنا المستهدف هو محضر لصبغيات الطور التالي metaphase ونوى الطور البيني interphase (لا انقسامية ) المفروشة على شريحة مجهرية.

يتمسخ denature كلا من الدنا المستهدف ودنا المسبار مما يؤدي إلى دنا وحيد الطاق.

يضاف المسبار إلى محضر الصبغيات ويحضن فترة كافية لتسمح لتسسلات الدنا التتميمية للمسبار والهدف أن يلحتما أو يهجنا إذا وجد التسلسل المستهدف.

سوف يتهجن الدنمن فقط إلى الطيقان strands التتميمية complementary وليس مع شدف ذات تسلسل دنا مختلف من أجزاء أخرى من المجين.

يتم التأكد من وجود او غياب المسبار الموسوم بملون تألقي المرتبط عن طريق فحص العينة بمجهر مؤلق والنتائج عادة غير ملتبسة.

ميزات التهجين الموضعي المتألق الـFISH:

تضم مايلي:

1-    التحليل السريع لعدد كبير من الخلايا

2-    الحساسية والنوعية العاليتان

3-    القدرة على تحليل خلايا غير مزروعة ولا انقسامية.

يمكن تحليل الخلايا المسجاة embedded في البارافين.

مساوئ التهجين الموضعي المتألق الـFISH:

تضم المساوئ عجزها عن توفير المعلومات فيما يتعلق بالحالة الفيزيائية للدنا أو قطعة الصبغي التي تم التعرف عليها.

ماذا يتطلب إنجاز التهجين الموضعي المتألق الـ FLSH؟

يتطلب مايلي:

1-    معرفة المواضع المصابة في الزيغ

2-    معرفة المسابير الملائمة التي ستكتشف هذا الزيغ.

استخدام التهجين الموضعي المتألق الـFLSH:

1-    التشخيص قبل الولادي

2-    تمييز الاورام

3-    في ممارسة طب الأطفال

4-    يستخدم عادة لكشف الخبنات الصبغية غير المرئية بالمجهر المترافقة مع متلازمات تشوهية معينة.

لا يمكن استخدام الـ FLSH كأداة تقصي, وإنما تستخدم للإجابة على أسئلة نوعية .

 تستخدم بشكل عام إما كمتممة لطرق تلوين الصبغيات الكلاسيكية أو كبديل من أجل التعرف على الصبغيات في الطور التالي أو الطور البيني ، أو للتعرف على تسلسل دنا نوعي نعرف إصابته في مرض يمكن التعرف عليه (نمط ظاهري).

الدكتور رضوان غزال MD, FAAP- مصدر المعلومات : كتاب نلسون طب الاطفال 2016- آخر تحديث 18/1/2018